im体育App

您好,欢迎来到im体育App!
400-6111-883
| EN
400-6111-883
Hieff NGS? One-Step Globin mRNA Removal Kit (Human) 一步快速去除珠蛋白mRNA试剂盒(人)
产品货号:12260ES08
产品规格:8 T
产品价格:? 3255
类别:核糖体去除

说明书下载

  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格/元

    Hieff NGS? One-Step Globin mRNA Removal Kit (Human)

    一步快速去除珠蛋白mRNA试剂盒(人)

    12260ES08

    8 T

    3255

    12260ES24

    24 T

    6855

    12260ES96

    96 T

    24855

     

    产品描述

     

    血液样本来源的mRNA中珠蛋白mRNA约占30%-70%,占据了大量的RNA测序数据,因此血液样本RNA建库过程中珠蛋白mRNA的去除是提高测序数据信息量的有效方法。Hieff NGS? One-Step Globin mRNA Removal Kit (Cat#12260)利用靶向技术在cDNA合成过程中高特异性地抑制总RNA中的珠蛋白mRNA的逆转录,而不影响其他mRNA、非编码RNA以及环状RNA等非靶RNA的cDNA合成,从而在一链cDNA合成过程中高特异性去除珠蛋白mRNA。本产品结合im体育App的Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit (Cat#12258/12259),可以对人类血液样本来源RNA中的rRNA和珠蛋mRNA进行快速靶向去除。这种靶向去除技术相较于传统的RNase H消化法具有耗时短 (4 min)、操作简单(一步操作)和非靶RNA保留完整等优点,极大简化了操作流程和提高了建库效率,可以与市面上各类一链cDNA合成试剂配套使用。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的珠蛋白mRNA去除效果。经珠蛋白mRNA去除所获得的cDNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于其它cDNA下游应用。提供的试剂已经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了珠蛋白mRNA去除的稳定性和重复性。

     

    适用范围

     

    适用于全血RNA来源的1 ng-1 μg的总RNA样品。

     

    产品组分

     

    产品组份

    12260ES08

    12260ES24

    12260ES96

    One-Step Globin mRNA Removal Mix

    8 μL

    24 μL

    96 μL

     

    运输与保存方法

     

    干冰运输,-20°C存放。效期两年。

     

    注意事项

     

    一、关于操作

    1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    2. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZapTM 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

    3. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

    4. 若样品体积较大,可先进行浓缩。

    5. 本产品仅用作科研用途!

    二、自备材料

    1. qRT-PCR质检珠蛋白mRNA去除效率:Hieff? qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox) (Cat#11201)或其他等效产品

    2. 其他材料:无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、PCR仪等。

     

    使用方法

     

    一、操作流程

    6-1.png


    1
    .使用快速去除rRNA (Cat#12258)及Globin mRNA (Cat#12260)试剂盒、RNA建库试剂盒进行RNA建库流程

     

    二、操作步骤方案

    方案1 :在逆转录体系中去除rRNA和Globin mRNA。

    使用im体育App的Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11119)进行本试剂盒rRNA去除效率测试。

    1. 逆转录反应体系按下表进行20 μL体系)

     

    RNA非片段化体系*


    RNA片段化体系**

    在PCR管中加入以下组份:

    在PCR管中加入以下组份:

    Total RNA

    1 ng-1 μg

    Total RNA

    1 ng-1 μg

    Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL

    Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL

    One-Step rRNA Removal Mix (Cat#12258/12259)

    1 μL

    One-Step rRNA Removal Mix (Cat#12258/12259)

    1 μL

    One-Step Globin mRNA Removal Mix (Cat#12260)

    1 μL

    One-Step Globin mRNA Removal Mix (Cat#12260)

    1 μL

    RNase free H2O

    To 14 μL

    5×Hifair? Ⅱ Buffer

    4 μL

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    RNase free H2O

    To 18 μL

    75°C

    1 min

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    65°C

    1 min

    94°C(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

    7 min

    50°C

    2 min

    75°C

    1 min

    4°C

    Hold

    65°C

    1 min

    在PCR管中加入以下组份:

    50°C

    2 min

    上述反应体系

    14 μL

    4°C

    Hold

    5×Hifair? Ⅱ Buffer

    4 μL

    在PCR管中加入以下组份:

    Hifair? Ⅱ Enzyme Mix

    2 μL

    上述反应体系

    18 μL

    Total

    20 μL

    Hifair? Ⅱ Enzyme Mix

    2 μL

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    Total

    20 μL

    25°C

    5 min

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应

    42°C

    30 min

    25°C

    5 min

    85°C

    5 min

    42°C

    15 min



    85°C

    5 min

     

    【注】:*:RNA非片段化体系主要是为了保证RNA的完整性,主要应用于cDNA库的制备、RT-qPCR,低浓度RNA建库和三代测序建库等领域

    **:RNA片段化体系主要是为了保证RNA在建库过程中的有效片段化,主要应用于RNA二代测序。客户可根据实验需求自行选择。

     

    2. qPCR检测rRNA及Globin mRNA去除效果。

     


    6-2.png

     

    2.qPCR验证rRNA及Globin mRNA一步法去除试剂盒的去除效果。 DEPC H2O:未添加去除rRNA和Globin mRNA的探针进行qPCR;Cat#12258+12260:在反应体系中同时使用本公司试剂盒Cat#12258+Cat#12260的探针去除rRNA和Globin mRNA后进行qPCR。

     

    方案2:在RNA NGS文库构建中去除rRNA和Globin mRNA。

    1. 使用im体育App的Hieff NGS? Dual-mode RNA Library Prep Kit (Cat#12252 for Illumina, Cat#13332 for MGI)进行本试剂盒rRNA和Globin mRNA去除效率测试:

     

    组分

    体积

    Total RNA

    1 ng-1 μg

    2×Frag/Prime Buffer

    8.5 μL

    One-Step rRNA Removal Mix (Cat#12258)

    1 μL

    One-Step Globin mRNA Removal Mix (Cat#12260)

    1 μL

    DEPC H2O

    to 17 μL

     

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    温度

    时间

    94°C(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

    5-7 min

    75°C

    1 min

    65°C

    1 min

    50°C

    2 min

    4°C

    Hold

    反应结束后接下游一链合成体系。

     

     6-3.png

    3.二代测序验证一步法快速去除rRNA和Globin mRNA试剂盒的去除效果。DEPC H2O:未使用去除rRNA和Globin mRNA的探针进行建库测序;Cat#12258+12260:在反应体系中同时使用本公司试剂盒Cat#12258+Cat#12260的探针去除rRNA和Globin mRNA后进行建库测序

     

    2. 使用New England Biolabs的NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina (Cat#E7760)联合本试剂盒进行rRNA去除方案:

    组份

    体积

    Total RNA

    1 ng-1 μg

    First Strand Synthesis Reaction Buffer (5×)

    4 μL

    Random Primers

    1 μL

    One-Step rRNA Removal Mix (Cat#12258)

    1 μL

    One-Step Globin mRNA Removal Mix (Cat#12260)

    1 μL

    DEPC H2O

    to 10 μL

     
    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    温度

    时间

    94°C(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

    5-15 min

    75°C

    1 min

    65°C

    1 min

    50°C

    2 min

    4°C

    Hold

    反应结束后接下游一链合成体系。

    方案3:在mRNA NGS文库构建中去除Globin mRNA。

    使用im体育App的Hieff NGS? mRNA Isolation Master Kit mRNA (Cat#12603)进行本试剂盒mRNA的富集。

    组份

    体积

    mRNA captured from total RNA

    X*

    2×Frag/Prime Buffer

    8.5 μL

    One-Step Globin mRNA Removal Mix (Cat#12260)

    1 μL

    DEPC H2O

    to 17 μL

     

    吹打悬浮oligo (dT)磁珠,按照下列反应程序进行反应:

    温度

    时间

    94°C(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

    5-7 min

    75°C

    1 min

    65°C

    1 min

    50°C

    2 min

    4°C

    Hold

    【注】:*从100 ng-4 μg总RNA中进行捕获得到的mRNA

     

    反应结束后接下游一链合成体系。

     

     

    HB210809

Baidu
sogou