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Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit (Human,1-100 ng) 一步快速去除核糖体RNA试剂盒(人)
产品货号:12259ES08
产品规格:8 T
产品价格:? 3165
类别:核糖体去除

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  • 产品信息

     

    产品名称

    产品编号

    规格

    价格/元

    Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit (Human,1-100 ng)

    一步快速去除核糖体RNA试剂盒(人)

    12259ES08

    8 T

    3165

    12259ES24

    24 T

    11365

    12259ES96

    96 T

    37365

     

    产品描述

     

    Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit (Human,1-100 ng)利用靶向技术在cDNA合成过程中高特异性地抑制人总RNA中的核糖体RNA的逆转录,而不影响信使RNA (mRNA)、非编码RNA以及环状RNA等非靶RNA的cDNA合成,从而在一链cDNA合成过程中高特异性去除核糖体RNA。这种靶向去除技术相较于传统的RNase H消化法具有耗时短 (3 min)、操作简单(一步操作)和非靶RNA保留完整等优点,极大简化了操作流程和提高了建库效率,可以与市面上各类一链cDNA合成试剂配套。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA(如FFPE RNA)均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的cDNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于其它cDNA下游应用。提供的试剂已经过严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了rRNA去除的稳定性和重复性。

     

    适用范围

     

    适用于人来源的1-100 ng 总RNA样品;适用于完整或部分降解RNA(如FFPE RNA)样品。

     

    产品组分

     

    产品组份

    12259ES08

    12259ES24

    12259ES96

    One-Step rRNA Removal Mix 

    8 μL

    24 μL

    96 μL

     

    运输与保存方法

     

    干冰运输,-20°C存放效期两年。

     

    注意事项

     

    一、 关于操作

    1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap? 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

    2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

    3.若样品体积较大,可先进行浓缩。

    4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

    5. 本产品仅作科研用途!

    二、自备材料

    1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff? qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) (Cat#11201)或其他等效产品;

    2. 其他材料:无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、PCR仪等。

     

    使用方法

     

    、操作流程

    9-1.png 

    1. 使用快速去除核糖体RNA试剂盒+RNA建库试剂盒进行RNA建库流

     

    、操作步骤

    方案1:在逆转录体系中去除rRNA。

    1. 使用im体育App生物的Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11119)进行本试剂盒rRNA去除效率测试,其他逆转录试剂盒也可以用于本测试。

    2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

     

    RNA不片段化体系


    RNA片段化体系

    Total RNA

    1-100 ng


    Total RNA

    1-100 ng

    Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL


    Random Primers N6 (50 μM)

    1 μL

    One-Step rRNA Removal Mix

    1 μL


    One-Step rRNA Removal Mix

    1 μL

    RNase free ddH2O

    To 14 μL


    5×HifairⅡ Buffer

    4 μL

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:


    RNase free ddH2O

    To 18 μL

    75℃

    1 min


    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    50℃

    2 min


    94℃(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

    5 min

    4℃

    Hold


    75℃

    1 min




    50℃

    2 min

    上述反应体系

    14 μL


    4℃

    Hold

    5×HifairⅡ Buffer

    4 μL




    HifairⅡ Enzyme Mix

    2 μL


    上述反应体系

    18 μL

    Total

    20 μL


    HifairⅡ Enzyme Mix

    2 μL

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:


    Total

    20 μL

    25℃

    5 min


    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    42℃

    30 min


    25℃

    5 min

    85℃

    5 min


    42℃

    15 min




    85℃

    5 min

                                                                      

    3. qPCR检测rRNA去除效果。

     


     9-2.png

    2.qPCR验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果

     

    方案2:在RNA NGS文库构建中去除rRNA。

    1. 使用im体育App生物的Hieff NGS? Dual-mode RNA Library Prep Kit (Cat#12252 for Illumina, 13333 for MGI)进行本试剂盒rRNA去除效率测试。

     

    RNA片段化

    组份

    体积

    Total RNA

    1-100 ng

    2×Frag/Prime Buffer

    8.5 μL

    One-Step rRNA Removal Mix

    1 μL

    DEPC H2O

    to 17 μL

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    温度

    时间

    94℃(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

    5 min

    75℃

    1 min

    50℃

    2 min

    4℃

    Hold



    组份

    体积

    上述反应体系

    17 μL

    Strand Specificity Reagent

    6 μL

    1st Strand Enzyme Mix

    2 μL

    Total

    25 μL

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    温度

    时间

    25℃

    10 min

    42℃

    15 min

    70℃

    15 min

    接Step 2第二链cDNA的合成/末端修复/加A

     


     9-3.png

    3. 二代测序验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果

     

     

    2. 使用New England Biolabs的NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina (Cat#E7760)联合本试剂盒进行rRNA去除方案

     

    RNA片段化

    组份

    体积

    Total RNA

    1-100 ng

    First Strand Synthesis Reaction Buffer (5×)

    4 μL

    Random Primers

    1 μL

    One-Step rRNA Removal Mix

    1 μL

    DEPC H2O

    to 10 μL

    混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

    温度

    时间

    94℃(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

    5 min

    75℃

    1 min

    50℃

    2 min

    4℃

    Hold

    接下游一链合成体系

     

    3. 其他品牌RNA 建库试剂盒请咨询!

     


    HB210923

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