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独家专利 | rRNA去除“黑科技”上线『一步操作,3 min去除』


导读

近年来, RNA二代测序技术成为生命进展和疾病诊断等领域的重要研究手段。但是,不同来源的样本中的RNA种类占比具有极大的不均一性,如正常细胞中核糖体rRNA约占总RNA的90%?95%,血液中珠蛋白的mRNA约占总mRNA的76%以上,这些RNA的存在占据了大部分的测序数据,严重影响到低丰度RNA的检测,提高了测序的成本。


图1 人类组织细胞RNA组成分布.jpg

图1.人类组织/细胞RNA组成分布


因而在转录组学研究中,rRNA的去除,对于实现RNA经济高效的测序至关重要。



传统rRNA去除操作复杂,耗时长

目前国内主要以RNase H酶消化法为主,特别对于部分RNA降解样本(如FFPE样本)RNA酶消法更能展现其优势。

图2. rRNA去除(RNase H酶消化法).png

图2. rRNA去除(RNase H酶消化法)

虽然目前基于RNase H酶消化去除的方法被广泛使用,但是整体流程相对复杂,全流程耗时约2 h左右,操作共需要30多步,对于mNGS检测和自动化建库等应用来说,时间太长,操作太复杂,难以实现高效的交付。

建库黑科技,3min完成靶RNA高效去除

im体育App自主研发的一步靶RNA去除快速技术可以在RNA建库过程中快速去除不需要的rRNA和珠蛋白RNA,整个过程只需要3 min,一步操作。产品包括Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit(一步法快速rRNA去除试剂盒)和Hieff NGS? One-Step Globin RNA Removal Kit(一步法快速珠蛋白RNA去除试剂盒)。

图3. 逆转录阻碍探针法去除rRNA原理示意图.png
图3. 逆转录阻碍探针法去除rRNA原理示意图

一步靶RNA去除快速技术的原理是利用强结合能力的逆转录阻碍探针优先封闭靶RNA,阻止逆转录酶通过逆转录阻碍探针锁定的靶RNA位点,从而达到在逆转录过程中去除靶RNA的目的。

图4.逆转录阻碍探针法在NGS建库过程中快速去除靶RNA原理示意图(仅需3min).png
图4.逆转录阻碍探针法在NGS建库过程中快速去除靶RNA原理示意图(仅需3min)

相较于传统RNA富集方法,一步法rRNA去除试剂具有以下优点:

操作简单(仅需一步加样操作)

耗时3 min(无需额外的纯化操作)

对非靶RNA保留完整、特异性强、效率高和基因检出数高

一步法rRNA去除试剂极大简化了操作流程和提高了建库效率,且可以与市面上各类一链cDNA合成试剂配套,适用于工业自动化建库和疾病快速诊断(如mNGS)领域。

rRNA去除产品介绍


操作时间对比

图5. 不同rRNA去除方法操作时间对比.png
图5. 不同rRNA去除方法操作时间对比


◎ 不同起始量 RNA样本中rRNA去除效率对比

图6. 不同起始量RNA样本中rRNA去除效率对比。.png
图6. 不同起始量RNA样本中rRNA去除效率对比

【注】:为了获得更好的建库产量,我们建议1-100ng RNA投入量使用12259,100-1000ng RNA投入量使用12258。


◎ 不同质量FFPE RNA样本中rRNA去除效率对比

图7. 不同质量度RNA样本去除效率对比;左(DV200=70%), 中(DV200=43%),右(DV200=12%).png
图7. 不同质量度RNA样本去除效率对比;左(DV200=70%), 中(DV200=43%),右(DV200=12%)


◎ 基因检出数比较

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图8. 不同去除rRNA方法的基因检出数比较


rRNA去除产品获独家专利授权

im体育App逆转录阻碍探针法获得了国家知识产权局的发明专利授权。任何在逆转录过程中利用逆转录阻碍探针混合物去除靶RNA的方法都应属于本专利的保护范围。

图9. 发明专利证书.jpg
图9. 发明专利证书


订购信息

产品名称

产品货号

产品规格

Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit(Human, 100-1000ng)

12258ES08/24/96

8/24/96T

Hieff NGS? One-Step rRNA Removal Kit(Human, 1-100 ng)

12259ES08/24/96

8/24/96T

Hieff NGS? One-Step Globin mRNA Removal Kit

12260ES08/24/96

8/24/96T


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